神经科学研究中，精准定位大小鼠脑部特定区域是开展脑功能解析、疾病机制探索及药物干预等实验的核心前提。大小鼠脑立体定位仪凭借对脑部坐标的精准把控，成为实现这一目标的关键设备。掌握其规范使用方法，不仅能保障实验操作的安全性，更能提升实验结果的准确性与可重复性。

一、实验前准备

动物准备：选用合适的大小鼠，实验前需禁食一段时间，避免实验过程中动物腹胀影响操作。称重后，通过腹腔注射适宜的麻醉剂，如1%戊巴比妥（小鼠剂量约为80mg/100g体重），将动物放置于饲养笼内，等待5-10分钟，确保其完全麻醉。麻醉完成后，用剃毛器将动物头部毛发剃除干净，方便后续操作。

器械准备：对手术器械，如剪刀、镊子等，用75%酒精浸泡消毒。准备好大小鼠脑立体定位仪，检查其各部件是否完好、可正常调节。将微量注射器、针头、颅骨钻等相关工具也准备齐全，并确保微量注射器清洁且能正常工作，可先用PBS冲洗3-5次（每次吸取5μl）。同时，依据实验需求，参考相应的脑图谱，确定目标脑区的坐标。

二、动物固定

安装动物于定位仪：将麻醉且剃毛后的大小鼠放置在大小鼠脑立体定位仪上。先把动物门齿卡在适配器门齿夹上，轻轻压上门齿夹横杆，适当调整适配器高度和前后位置，以便耳杆能顺利进入外耳道。接着，左手托起动物头部，将左侧耳杆插入耳道并固定，随后插入右侧耳杆。仔细调节左右两侧耳杆，使动物头部处于u型开口的中心位置，先锁紧一侧耳杆，再旋紧另一侧，确保动物头部无法晃动，同时旋紧门齿夹螺丝。

固定效果检查：固定完成后，需检查固定效果。应保证动物鼻部对正中间，头部稳定不动，提起尾巴时动物不掉落，并且目测头顶位置处于水平状态。若不符合要求，需重新调整。

三、暴露头骨及水平校准

皮肤消毒与切开：依次使用碘伏和75%酒精对动物头顶皮肤进行消毒。之后，用眼科剪沿头部中间位置剪开皮肤，长度约0.8cm，充分暴露颅骨。

结缔组织清理与囟门暴露：去除颅骨表面的结缔组织，可用刀片小心刮除或用双氧水擦拭，使前囟、后囟清晰暴露出来。这一步需谨慎操作，避免损伤颅骨下方的脑组织。

水平校准：调整脑立体定位仪，使前囟和后囟处于同一水平位置，同时保证左右两侧平行。将微量注射器针头置于前囟点位置，把此处坐标归零，为后续确定目标脑区位置做准备。

四、目标脑区定位与操作

确定目标脑区位置：根据实验前确定的目标脑区坐标，以前囟为参考点，在颅骨表面标记出相应的下针点。例如，若目标脑区坐标为（x,y,z），通过调节脑立体定位仪的x轴、y轴、z轴旋钮，移动操作臂至相应位置。

颅骨钻孔：移开注射针，使用颅骨钻在标记位置小心轻磨颅骨，将颅骨打薄直至出现裂缝，再用1ml医用注射器针头小心挑开颅骨。操作过程中要防止针头扎到脑组织，若有出血情况，可用小的医用棉球拉成长条形吸血。

病毒或药物注射：用PBS再次冲洗微量注射器3-5次，每次吸取5μl。吸取适量注射物，先吸取1μl空气，再吸取实验所需的病毒或药物（可在空气中测试注射器是否通畅）。将微量注射器固定在脑立体定位仪上，并与微量注射泵相连。将注射器针头经颅骨钻孔处垂直插入脑内目标位置，启动微量注射泵，以合适的速度注射，如0.2μl/min。注射完成后，留针5-8分钟，使注射物充分扩散，之后缓慢抽出注射器针头。

五、术后处理

伤口缝合与消毒：用医用缝合线缝合动物头部皮肤，再次用碘伏对创口及其附近进行消毒，防止感染。

动物复苏：将动物从脑立体定位仪上取下，放置于饲养笼内，可在旁边放置电暖器，帮助动物保持体温，等待其苏醒。密切观察动物的苏醒情况及后续状态。

从实验前的坐标确定、器械消毒，到操作中的动物固定、脑区定位，再到术后的伤口处理与动物复苏，需严格遵循大小鼠脑立体定位仪的使用规范与流程，规避操作误差与动物损伤风险。